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    熒光素鉀鹽使用說明

    Release Time:2023-07-20
    熒光素鉀鹽使用說明:
    D-熒光素鉀鹽(K+)設計用于體外和體內生物發光測定。D-熒光素鉀鹽一般為黃綠色,激發波長為494nm,發射波長為521nm。D-熒光素的質量和純度對于獲得良好和可重復的結果至關重要。BIOFOUNT可提供高質量的無內毒素D-熒光素K+鹽
    二、D-熒光素鉀鹽的使用方法:

    1. 溶液的制備
    D-熒光素鉀鹽的溶液可以用于染色、標記、檢測等多種應用。
    制備D-熒光素鉀鹽溶液的方法:
    a.首先稱取適量的D-熒光素鉀鹽,加入適量的去離子水中后進行均勻攪拌;
    b.使用過濾膜將溶液過濾,除菌。
    c.將D-熒光素鉀鹽溶液調節至所需要的濃度。

    2. 染色實驗過程
    D-熒光素鉀鹽可以用于細胞染色、組織染色等染色實驗,實驗方法如下:
    a.首先將細胞或組織樣本固定在載玻片上。
    b.然后加入適量的D-熒光素鉀鹽溶液,使試劑溶液可以覆蓋樣本。
    c.在黑暗條件下可以孵育一段時間,使D-熒光素鉀鹽充分滲透入細胞或組織中。
    d.使用PBS緩沖液洗滌樣本,去除多余的D-熒光素鉀鹽。
    e.在顯微鏡下觀察樣本,觀察樣品的熒光信號。

    3. 實驗標記
    D-熒光素鉀鹽也可以用于標記蛋白質、核酸等生物分子。
    實驗標記方法:
    a.首先將蛋白質或核酸與d-熒光素鉀鹽共同孵育。
    b.再用凝膠電泳等方法分離標記后的生物分子。
    c.最后在熒光顯微鏡下觀察標記后的生物分子即可。

    4. 檢測方法
    D-熒光素鉀鹽可用于檢測生物分子的存在和濃度。
    D-熒光素鉀鹽檢測方法:
    a.將d-熒光素鉀鹽與待檢測的生物分子進行共同孵育。
    b.用凝膠電泳等方法分離孵育后的混合物。
    c.在熒光顯微鏡下觀察熒光信號,即可判斷生物分子的存在和濃度。
    1.說明
    1.1.簡介及特點
    祝賀您購買了BIOFOUNT的D-熒光素鉀鹽產品!
    D-熒光素,鉀鹽是一種合成螢火蟲熒光素。這種高純度、無內毒素的產品
    非常適合體外和體內生物發光測定。高質量的基板消除了可能由于內毒素的存在而干擾測定。中性條件下的正確包裝確保了產品的完整性和穩定性。這種螢光素酶的水溶性基質是現成的,易于使用。
    主要特點有:
    •高純度>99.5%
    •溶解性好,靈敏度高
    •用于生物發光測定的可靠體內報告基因
    •不含內毒素(非常適合體內應用)
    •適用于體外實驗
    •易于使用
    •在整個動物體內快速和更容易分布
    -熒光素,鉀鹽:
    −化學名稱:4,5-二氫-2-(6-羥基-2-苯并噻唑基)-4-噻唑羧酸鉀鹽
    −分子式:C11H7N2O3S2K
    −分子量:318.42 g/mol
    −CAS編號:115144-35-9
    −分子結構:
    −分子生物學等級和高級純度:99.7%純度。通過九個獨立標準驗證質量包括HPLC和FTIR。
    1.2穩定性和儲存
    ※ D-熒光素對光、氧氣和水分敏感,呈粉末狀和溶液狀。
    ※ 儲存(粉末)收到并長期使用后,將粉末儲存在密閉的干燥容器,-20°C。D-熒光素在-20℃下至少穩定一年干燥和中性氣體條件。
    ※ 如果裝有D-熒光素粉末的瓶子必須反復打開和關閉,建議用惰性物質填充小瓶氣體(氬氣或氮氣)。
    ※ 儲存(溶液)D-熒光素儲備溶液可以在水中或D-PBS中制備,然后在-20°C下冷凍或優選在-80°C下。D-熒光素溶液的穩定性是相當有爭議的
    ※ 解決方案:盡管存在以上問題,冷凍的D-熒光素溶液(-80°C)仍然適合使用,D-熒光素是在低pH(<6.5)和高pH(>7.5)下相當不穩定。為了避免重復的冷凍和解凍循環,我們建議用小管等分D-Luciferin溶液,并將其儲存在-80°C下。
    2.應用
    ※ 活細胞、組織和動物模型中的生物發光測定
    ※ 螢光素酶報告基因測定
    ※ 全動物成像(體內和體外基因測定)
    ※ 熒光素酶基因實驗
    ※ ATP測定(螢光素酶催化ATP轉化為AMP)和免疫測定
    ※ 焦磷酸測序
    ※用于序列基因分析實驗
    3. 以下是D-熒光素鉀鹽可以快速實現非常高的生物發光信號的使用指南。最佳使用條件因:動物、細胞培養、給藥途徑以及測定靈敏度而異。D-熒光素的最終含量可能需要調整才能達到最佳效果。

    3.1用于體內測定的D-熒光素的制備
    D-熒光素在整個動物體內的生物分布是快速且比較容易,但動力學可能依賴于組織。D-熒光素能穿透細胞膜,并能通過血腦屏障、血胎盤屏障和血睪丸屏障。
    材料:
    •D-熒光素,鉀鹽
    •D-PBS(不含Mg2+和Ca2+)
    •注射器過濾器0.2µM

    每次試驗最好是重新配制每個實驗所需的D-熒光素鉀鹽的量。然而,凍結的庫存也可以使用熒光素溶液(參見上面的儲存和穩定性部分)。
    1.將D-熒光素溶解在D-PBS中以獲得15或30mg/mL的最終濃度。
    2.通過0.2µM過濾器進行殺菌(可選,不需要)。
    3.在用10µL/g的身體對每只動物成像前5至15分鐘腹膜內或靜脈注射
    體重或150至300µg/g體重。為了有足夠甚至過量的基質,我們建議每只小鼠使用3mg D-熒光素(30mg/mL中的100µL)。
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